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- 品牌：佰利萊
- 產(chǎn)地：中國
- 型號：48T/96T
- 貨號：BLL109110E
- 價格： ￥805/盒
- 發(fā)布日期： 2024-11-06
- 更新日期： 2024-12-20
| 產(chǎn)地 | 中國 |
| 保存條件 | 2-8℃ |
| 品牌 | 佰利萊 |
| 貨號 | BLL109110E |
| 用途 | 科研 |
| 檢測方法 | 酶聯(lián)免疫法 |
| 保質(zhì)期 | 6個月 |
| 適應(yīng)物種 | 人 |
| 檢測限 | 0- |
| 數(shù)量 | 99 |
| 英文名稱 | |
| 包裝規(guī)格 | 48T/96T |
| 標記物 | HRP標記物 |
| 樣本 | 血清血漿組織液等 |
| 應(yīng)用 | 定量檢測/酶活檢測 |
| 是否進口 | 否 |
本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷
人（Human）丙酮酸脫氫酶激酶4（PDK4）
ELISA檢測試劑盒
使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被丙酮酸脫氫酶激酶4（PDK4）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并che底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的丙酮酸脫氫酶激酶4（PDK4）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品活性。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3. 樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
結(jié)果判斷
繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應(yīng)OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
